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细胞安好 便是晴天

时间:2020-04-15 09:20来源:未知 编辑:班德液氮罐 点击:
首先说冻存液配方,常用的配方一般是两种—— 90% FCS+10% DMSO 或 70% 培养基 + 20% FCS+10% DMSO。前一种较贵,而且后一种冻存效果也不错,因此本人一般选用第二种配方。对于比较脆弱的细胞则选用前一种冻存液。气相液氮罐

冻存步骤比较简单,前期处理同细胞传代,只是在离心后是直接汲取上清,用手拍打离心管底部,加入适量冻存液使细胞完全悬浮后分装于冻存管。制后先将冻存管放入4℃ 冰箱,约 40 min。 接着置于-20℃ 冰箱,约60 min。置于 -80℃ 超低温冰箱中放置过夜。 最后置于液氮罐中长期保存。 同时做好冻存记录,在自己的笔记本和冻存记录本上均要记录。

注意事项

1. 使用 DMSO 前,不需要进行高压灭菌,它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破坏它的分子结构,以至于降低冷冻保护效果。

2. 冻存时要选处于对数生长期的细胞,这样效果要好很多。

3. 不宜将冻存细胞放置在 0℃~-60℃ 这一温度范围内过久,低温损伤主要发生在这一温度区内,是「危险温区」。

4. 注意定期检查液氮罐内液氮量,及时添加。

5. 冻存液中的培养基要与培养时相同,避免细胞由于环境突然改变而死亡,在冻存管上也要标明培养基种类。

6. 冻存液不要预热。

7. 程序冻存盒非常好用,省事省时效果还好,强烈推荐冻存使用冻存盒。气相液氮罐

细胞复苏的原则是快速融化:必须将冻存在 -196℃ 液氮中的细胞快速融化至 37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

具体步骤

1. 将水浴锅预热至 40℃。

2. 用 75% 酒精擦拭紫外线照射 30 min 的超净工作台台面。

3. 在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

4. 根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

5. 从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。

6. 迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。

7. 约 1-2 min 后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁。

8. 平衡后,放入离心机中 3000 r/min 离心 3 min。

9. 吸弃上清液。

10. 向冻存管内加入1 ml培养液,吹打制成细胞悬液。

11. 最后将细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃ 和 5% CO2 的培养箱内 12-24 小时后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。

注意事项

复苏时选用的培养基要符合冻存管上标明的培养基。操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害。自液氮或干冰容器中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,由于热胀冷缩过程,此时盖子易松掉。
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